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Restriction Enzymes Cut Sites Table

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Restriction enzymes, also called restriction endonucleases, are a group of enzymes that cut DNA and are found naturally in bacteria. They help bacteria fight off viral infections (i.e. bacteriophages). Restriction enzymes are thought of as nature’s molecular scissors because they look for specific nucleotide sequences in DNA, called “restriction sites,” that they can bind to and then cut into pieces by hydrolyzing the phosphodiester backbone. Restriction fragments can have either blunt ends, which have 5′-phosphate groups that help them stick together, or sticky ends, which have 3′- or 5′-overhangs of one to four nucleotides and are more stable. These short pieces of single-stranded DNA can connect to themselves or to another piece of DNA that has a matching area. Because fragmentation happens at or near the recognition site and in a predictable way, restriction enzymes have become important tools in genetic engineering (e.g. DNA cloning and DNA fingerprinting).

Different kinds of restriction enzymes

Different types of bacteria make restriction enzymes that cut different sequences of nucleotides. Scientists have found and cleaned up hundreds of restriction enzymes and put them into four groups based on what they are made of, what the cleavage site looks like, and what the enzyme needs as a cofactor.

  • Type I restriction enzymes cut at random places about 1000 bp away from the restriction site. As cofactors for enzymes, you need ATP, AdoMet, and Mg2+. EcoK I, EcoA I, and CfrA I are all examples of Type I restriction enzymes.
  • Type II restriction enzymes cut close to or right at the restriction site, and they need Mg2+ as an enzyme cofactor. EcoR I, BamH I, and Hind III are all examples of Type II restriction enzymes.
  • Type III restriction enzymes cut at sites 24 to 26 bp away from the restriction site. ATP and Mg2+ are needed as cofactors for these enzymes. EcoP I, EcoP15 I, and Hinf III are all examples of Type II restriction enzymes.
  • Type IV restriction enzymes cut near the restriction site or at short distances from it. They also target modified DNA such as methylated, hydroxymethylated and glucosyl-hydroxymethylated DNA.
  • A = Adenine
  • C = Cytosine
  • G = Guanine
  • T = Thymine
  • N = A, C, G or T
  • M = A or C
  • R = A or G
  • W = A or T
  • Y = C or T
  • S = C or G
  • K = G or T
  • H = A, C or T
  • B = C, G or T
  • V = A, C or G
  • D = A, G or T

EnzymeRecognition SequenceCutOverhang
AatII5′- G A C G T/C -‘3
3′- C/T G C A G -‘5
5′-GACGT      C-3′
3′-C      TGCAG-5′
3′ ACGT
AbaSI5′- C N N N N N N N N N N N/N N N N N N N N N G -‘3
3′- G N N N N N N N N N/N N N N N N N N N N N C -‘5
5′-CNNNNNNNNNNN      NNNNNNNNNG-3′
3′-GNNNNNNNNN      NNNNNNNNNNNC-5′
3′ NN
Acc65I5′- G/G T A C C -‘3
3′- C C A T G/G -‘5
5′-G      GTACC-3′
3′-CCATG      G-5′
5′ GTAC
AccI5′- G T/M K A C -‘3
3′- C A K M/T G -‘5
5′-GT      MKAC-3′
3′-CAKM      TG-5′
5′ MK
AciI5′- C/C G C -‘3
3′- G G C/G -‘5
5′-C      CGC-3′
3′-GGC      G-5′
5′ CG
AclI5′- A A/C G T T -‘3
3′- T T G C/A A -‘5
5′-AA      CGTT-3′
3′-TTGC      AA-5′
5′ CG
AcuI5′- C T G A A G N14 N N/-‘3
3′- G A C T T C N14/N N -‘5
5′-CTGAAGN14NN      -3′
3′-GACTTCN14      NN-5′
3′ NN
AfeI5′- A G C/G C T -‘3
3′- T C G/C G A -‘5
5′-AGC      GCT-3′
3′-TCG      CGA-5′
Blunt
AflII5′- C/T T A A G -‘3
3′- G A A T T/C -‘5
5′-C      TTAAG-3′
3′-GAATT      C-5′
5′ TTAA
AflIII5′- A/C R Y G T -‘3
3′- T G Y R C/A -‘5
5′-A      CRYGT-3′
3′-TGYRC      A-5′
5′ CRYG
AgeI5′- A/C C G G T -‘3
3′- T G G C C/A -‘5
5′-A      CCGGT-3′
3′-TGGCC      A-5′
5′ CCGG
AhdI5′- G A C N N N/N N G T C -‘3
3′- C T G N N/N N N C A G -‘5
5′-GACNNN      NNGTC-3′
3′-CTGNN      NNNCAG-5′
3′ N
AleI-v25′- C A C N N/N N G T G -‘3
3′- G T G N N/N N C A C -‘5
5′-CACNN      NNGTG-3′
3′-GTGNN      NNCAC-5′
Blunt
AluI5′- A G/C T -‘3
3′- T C/G A -‘5
5′-AG      CT-3′
3′-TC      GA-5′
Blunt
AlwI5′- G G A T C N4/N -‘3
3′- C C T A G N4 N/-‘5
5′-GGATCN4      N-3′
3′-CCTAGN4N      -5′
5′ N
AlwNI5′- C A G N N N/C T G -‘3
3′- G T C/N N N G A C -‘5
5′-CAGNNN      CTG-3′
3′-GTC      NNNGAC-5′
3′ NNN
ApaI5′- G G G C C/C -‘3
3′- C/C C G G G -‘5
5′-GGGCC      C-3′
3′-C      CCGGG-5′
3′ GGCC
ApaLI5′- G/T G C A C -‘3
3′- C A C G T/G -‘5
5′-G      TGCAC-3′
3′-CACGT      G-5′
5′ TGCA
ApoI5′- R/A A T T Y -‘3
3′- Y T T A A/R -‘5
5′-R      AATTY-3′
3′-YTTAA      R-5′
5′ AATT
AscI5′- G G/C G C G C C -‘3
3′- C C G C G C/G G -‘5
5′-GG      CGCGCC-3′
3′-CCGCGC      GG-5′
5′ CGCG
AseI5′- A T/T A A T -‘3
3′- T A A T/T A -‘5
5′-AT      TAAT-3′
3′-TAAT      TA-5′
5′ TA
AsiSI5′- G C G A T/C G C -‘3
3′- C G C/T A G C G -‘5
5′-GCGAT      CGC-3′
3′-CGC      TAGCG-5′
3′ AT
AvaI BsoBI5′- C/Y C G R G -‘3
3′- G R G C Y/C -‘5
5′-C      YCGRG-3′
3′-GRGCY      C-5′
5′ YCGR
AvaII5′- G/G W C C -‘3
3′- C C W G/G -‘5
5′-G      GWCC-3′
3′-CCWG      G-5′
5′ GWC
AvrII5′- C/C T A G G -‘3
3′- G G A T C/C -‘5
5′-C      CTAGG-3′
3′-GGATC      C-5′
5′ CTAG
BaeGI5′- G K G C M/C -‘3
3′- C/M C G K G -‘5
5′-GKGCM      C-3′
3′-C      MCGKG-5′
3′ KGCM
BaeI5′- N N N N N/N10 A C N N N N G T A Y C N7 N N N N N/-‘3
3′-/N N N N N N10 T G N N N N C A T R G N7/N N N N N -‘5
5′-NNNNN      N10ACNNNNGTAYCN7NNNNN      -3′
3′-      NNNNNN10TGNNNNCATRGN7      NNNNN-5′
3′ NNNNN
BamHI5′- G/G A T C C -‘3
3′- C C T A G/G -‘5
5′-G      GATCC-3′
3′-CCTAG      G-5′
5′ GATC
BanI5′- G/G Y R C C -‘3
3′- C C R Y G/G -‘5
5′-G      GYRCC-3′
3′-CCRYG      G-5′
5′ GYRC
BanII5′- G R G C Y/C -‘3
3′- C/Y C G R G -‘5
5′-GRGCY      C-3′
3′-C      YCGRG-5′
3′ RGCY
BbsI5′- G A A G A C N2/N N N N -‘3
3′- C T T C T G N2 N N N N/-‘5
5′-GAAGACN2      NNNN-3′
3′-CTTCTGN2NNNN      -5′
5′ NNNN
BbvCI5′- C C/T C A G C -‘3
3′- G G A G T/C G -‘5
5′-CC      TCAGC-3′
3′-GGAGT      CG-5′
5′ TCA
BbvI5′- G C A G C N8/N N N N -‘3
3′- C G T C G N8 N N N N/-‘5
5′-GCAGCN8      NNNN-3′
3′-CGTCGN8NNNN      -5′
5′ NNNN
BccI5′- C C A T C N4/N -‘3
3′- G G T A G N4 N/-‘5
5′-CCATCN4      N-3′
3′-GGTAGN4N      -5′
5′ N
BceAI5′- A C G G C N12/N N -‘3
3′- T G C C G N12 N N/-‘5
5′-ACGGCN12      NN-3′
3′-TGCCGN12NN      -5′
5′ NN
BcgI5′- N N/N10 C G A N N N N N N T G C N10 N N/-‘3
3′-/N N N10 G C T N N N N N N A C G N10/N N -‘5
5′-NN      N10CGANNNNNNTGCN10NN      -3′
3′-      NNN10GCTNNNNNNACGN10      NN-5′
3′ NN
BciVI5′- G T A T C C N5 N/-‘3
3′- C A T A G G N5/N -‘5
5′-GTATCCN5N      -3′
3′-CATAGGN5      N-5′
3′ N
BclI5′- T/G A T C A -‘3
3′- A C T A G/T -‘5
5′-T      GATCA-3′
3′-ACTAG      T-5′
5′ GATC
BfaI5′- C/T A G -‘3
3′- G A T/C -‘5
5′-C      TAG-3′
3′-GAT      C-5′
5′ TA
BglI5′- G C C N N N N/N G G C -‘3
3′- C G G N/N N N N C C G -‘5
5′-GCCNNNN      NGGC-3′
3′-CGGN      NNNNCCG-5′
3′ NNN
BglII5′- A/G A T C T -‘3
3′- T C T A G/A -‘5
5′-A      GATCT-3′
3′-TCTAG      A-5′
5′ GATC
BlpI5′- G C/T N A G C -‘3
3′- C G A N T/C G -‘5
5′-GC      TNAGC-3′
3′-CGANT      CG-5′
5′ TNA
BmgBI5′- C A C/G T C -‘3
3′- G T G/C A G -‘5
5′-CAC      GTC-3′
3′-GTG      CAG-5′
Blunt
BmrI5′- A C T G G G N4 N/-‘3
3′- T G A C C C N4/N -‘5
5′-ACTGGGN4N      -3′
3′-TGACCCN4      N-5′
3′ N
BmtI5′- G C T A G/C -‘3
3′- C/G A T C G -‘5
5′-GCTAG      C-3′
3′-C      GATCG-5′
3′ CTAG
BpmI5′- C T G G A G N14 N N/-‘3
3′- G A C C T C N14/N N -‘5
5′-CTGGAGN14NN      -3′
3′-GACCTCN14      NN-5′
3′ NN
Bpu10I5′- C C/T N A G C -‘3
3′- G G A N T/C G -‘5
5′-CC      TNAGC-3′
3′-GGANT      CG-5′
5′ TNA
BpuEI5′- C T T G A G N14 N N/-‘3
3′- G A A C T C N14/N N -‘5
5′-CTTGAGN14NN      -3′
3′-GAACTCN14      NN-5′
3′ NN
BsaAI5′- Y A C/G T R -‘3
3′- R T G/C A Y -‘5
5′-YAC      GTR-3′
3′-RTG      CAY-5′
Blunt
BsaBI5′- G A T N N/N N A T C -‘3
3′- C T A N N/N N T A G -‘5
5′-GATNN      NNATC-3′
3′-CTANN      NNTAG-5′
Blunt
BsaHI5′- G R/C G Y C -‘3
3′- C Y G C/R G -‘5
5′-GR      CGYC-3′
3′-CYGC      RG-5′
5′ CG
BsaI5′- G G T C T C N/N N N N -‘3
3′- C C A G A G N N N N N/-‘5
5′-GGTCTCN      NNNN-3′
3′-CCAGAGNNNNN      -5′
5′ NNNN
BsaJI5′- C/C N N G G -‘3
3′- G G N N C/C -‘5
5′-C      CNNGG-3′
3′-GGNNC      C-5′
5′ CNNG
BsaWI5′- W/C C G G W -‘3
3′- W G G C C/W -‘5
5′-W      CCGGW-3′
3′-WGGCC      W-5′
5′ CCGG
BsaXI5′- N N N/N9 A C N N N N N C T C C N7 N N N/-‘3
3′-/N N N N9 T G N N N N N G A G G N7/N N N -‘5
5′-NNN      N9ACNNNNNCTCCN7NNN      -3′
3′-      NNNN9TGNNNNNGAGGN7      NNN-5′
3′ NNN
BseRI5′- G A G G A G N8 N N/-‘3
3′- C T C C T C N8/N N -‘5
5′-GAGGAGN8NN      -3′
3′-CTCCTCN8      NN-5′
3′ NN
BseYI5′- C/C C A G C -‘3
3′- G G G T C/G -‘5
5′-C      CCAGC-3′
3′-GGGTC      G-5′
5′ CCAG
BsgI5′- G T G C A G N14 N N/-‘3
3′- C A C G T C N14/N N -‘5
5′-GTGCAGN14NN      -3′
3′-CACGTCN14      NN-5′
3′ NN
BsiEI5′- C G R Y/C G -‘3
3′- G C/Y R G C -‘5
5′-CGRY      CG-3′
3′-GC      YRGC-5′
3′ RY
BsiHKAI5′- G W G C W/C -‘3
3′- C/W C G W G -‘5
5′-GWGCW      C-3′
3′-C      WCGWG-5′
3′ WGCW
BsiWI5′- C/G T A C G -‘3
3′- G C A T G/C -‘5
5′-C      GTACG-3′
3′-GCATG      C-5′
5′ GTAC
BslI5′- C C N N N N N/N N G G -‘3
3′- G G N N/N N N N N C C -‘5
5′-CCNNNNN      NNGG-3′
3′-GGNN      NNNNNCC-5′
3′ NNN
BsmAI BcoDI5′- G T C T C N/N N N N -‘3
3′- C A G A G N N N N N/-‘5
5′-GTCTCN      NNNN-3′
3′-CAGAGNNNNN      -5′
5′ NNNN
BsmBI-v25′- C G T C T C N/N N N N -‘3
3′- G C A G A G N N N N N/-‘5
5′-CGTCTCN      NNNN-3′
3′-GCAGAGNNNNN      -5′
5′ NNNN
BsmFI5′- G G G A C N10/N N N N -‘3
3′- C C C T G N10 N N N N/-‘5
5′-GGGACN10      NNNN-3′
3′-CCCTGN10NNNN      -5′
5′ NNNN
BsmI5′- G A A T G C N/-‘3
3′- C T T A C/G N -‘5
5′-GAATGCN      -3′
3′-CTTAC      GN-5′
3′ CN
Bsp1286I5′- G D G C H/C -‘3
3′- C/H C G D G -‘5
5′-GDGCH      C-3′
3′-C      HCGDG-5′
3′ DGCH
BspCNI5′- C T C A G N7 N N/-‘3
3′- G A G T C N7/N N -‘5
5′-CTCAGN7NN      -3′
3′-GAGTCN7      NN-5′
3′ NN
BspEI5′- T/C C G G A -‘3
3′- A G G C C/T -‘5
5′-T      CCGGA-3′
3′-AGGCC      T-5′
5′ CCGG
BspHI5′- T/C A T G A -‘3
3′- A G T A C/T -‘5
5′-T      CATGA-3′
3′-AGTAC      T-5′
5′ CATG
BspMI BfuAI5′- A C C T G C N4/N N N N -‘3
3′- T G G A C G N4 N N N N/-‘5
5′-ACCTGCN4      NNNN-3′
3′-TGGACGN4NNNN      -5′
5′ NNNN
BsrBI5′- C C G/C T C -‘3
3′- G G C/G A G -‘5
5′-CCG      CTC-3′
3′-GGC      GAG-5′
Blunt
BsrDI5′- G C A A T G N N/-‘3
3′- C G T T A C/N N -‘5
5′-GCAATGNN      -3′
3′-CGTTAC      NN-5′
3′ NN
BsrFI-v25′- R/C C G G Y -‘3
3′- Y G G C C/R -‘5
5′-R      CCGGY-3′
3′-YGGCC      R-5′
5′ CCGG
BsrGI5′- T/G T A C A -‘3
3′- A C A T G/T -‘5
5′-T      GTACA-3′
3′-ACATG      T-5′
5′ GTAC
BsrI5′- A C T G G N/-‘3
3′- T G A C/C N -‘5
5′-ACTGGN      -3′
3′-TGAC      CN-5′
3′ GN
BssHII5′- G/C G C G C -‘3
3′- C G C G C/G -‘5
5′-G      CGCGC-3′
3′-CGCGC      G-5′
5′ CGCG
BssSI-v25′- C/A C G A G -‘3
3′- G T G C T/C -‘5
5′-C      ACGAG-3′
3′-GTGCT      C-5′
5′ ACGA
BstAPI5′- G C A N N N N/N T G C -‘3
3′- C G T N/N N N N A C G -‘5
5′-GCANNNN      NTGC-3′
3′-CGTN      NNNNACG-5′
3′ NNN
BstBI5′- T T/C G A A -‘3
3′- A A G C/T T -‘5
5′-TT      CGAA-3′
3′-AAGC      TT-5′
5′ CG
BstEII BstEII5′- G/G T N A C C -‘3
3′- C C A N T G/G -‘5
5′-G      GTNACC-3′
3′-CCANTG      G-5′
5′ GTNAC
BstNI5′- C C/W G G -‘3
3′- G G W/C C -‘5
5′-CC      WGG-3′
3′-GGW      CC-5′
5′ W
BstUI5′- C G/C G -‘3
3′- G C/G C -‘5
5′-CG      CG-3′
3′-GC      GC-5′
Blunt
BstXI5′- C C A N N N N N/N T G G -‘3
3′- G G T N/N N N N N A C C -‘5
5′-CCANNNNN      NTGG-3′
3′-GGTN      NNNNNACC-5′
3′ NNNN
BstYI5′- R/G A T C Y -‘3
3′- Y C T A G/R -‘5
5′-R      GATCY-3′
3′-YCTAG      R-5′
5′ GATC
BstZ17I5′- G T A/T A C -‘3
3′- C A T/A T G -‘5
5′-GTA      TAC-3′
3′-CAT      ATG-5′
Blunt
Bsu36I5′- C C/T N A G G -‘3
3′- G G A N T/C C -‘5
5′-CC      TNAGG-3′
3′-GGANT      CC-5′
5′ TNA
BtgI5′- C/C R Y G G -‘3
3′- G G Y R C/C -‘5
5′-C      CRYGG-3′
3′-GGYRC      C-5′
5′ CRYG
BtgZI5′- G C G A T G N10/N N N N -‘3
3′- C G C T A C N10 N N N N/-‘5
5′-GCGATGN10      NNNN-3′
3′-CGCTACN10NNNN      -5′
5′ NNNN
BtsCI5′- G G A T G N N/-‘3
3′- C C T A C/N N -‘5
5′-GGATGNN      -3′
3′-CCTAC      NN-5′
3′ NN
BtsI-v25′- G C A G T G N N/-‘3
3′- C G T C A C/N N -‘5
5′-GCAGTGNN      -3′
3′-CGTCAC      NN-5′
3′ NN
BtsIMutI5′- C A G T G N N/-‘3
3′- G T C A C/N N -‘5
5′-CAGTGNN      -3′
3′-GTCAC      NN-5′
3′ NN
Cac8I5′- G C N/N G C -‘3
3′- C G N/N C G -‘5
5′-GCN      NGC-3′
3′-CGN      NCG-5′
Blunt
ClaI BspDI5′- A T/C G A T -‘3
3′- T A G C/T A -‘5
5′-AT      CGAT-3′
3′-TAGC      TA-5′
5′ CG
CspCI5′- N N/N11 C A A N N N N N G T G G N10 N N/-‘3
3′-/N N N11 G T T N N N N N C A C C N10/N N -‘5
5′-NN      N11CAANNNNNGTGGN10NN      -3′
3′-      NNN11GTTNNNNNCACCN10      NN-5′
3′ NN
CviAII5′- C/A T G -‘3
3′- G T A/C -‘5
5′-C      ATG-3′
3′-GTA      C-5′
5′ AT
CviKI-15′- R G/C Y -‘3
3′- Y C/G R -‘5
5′-RG      CY-3′
3′-YC      GR-5′
Blunt
CviQI5′- G/T A C -‘3
3′- C A T/G -‘5
5′-G      TAC-3′
3′-CAT      G-5′
5′ TA
DdeI5′- C/T N A G -‘3
3′- G A N T/C -‘5
5′-C      TNAG-3′
3′-GANT      C-5′
5′ TNA
DpnI5′- G A/T C -‘3
3′- C T/A G -‘5
5′-GA      TC-3′
3′-CT      AG-5′
Blunt
DraI5′- T T T/A A A -‘3
3′- A A A/T T T -‘5
5′-TTT      AAA-3′
3′-AAA      TTT-5′
Blunt
DraIII5′- C A C N N N/G T G -‘3
3′- G T G/N N N C A C -‘5
5′-CACNNN      GTG-3′
3′-GTG      NNNCAC-5′
3′ NNN
DrdI5′- G A C N N N N/N N G T C -‘3
3′- C T G N N/N N N N C A G -‘5
5′-GACNNNN      NNGTC-3′
3′-CTGNN      NNNNCAG-5′
3′ NN
EaeI5′- Y/G G C C R -‘3
3′- R C C G G/Y -‘5
5′-Y      GGCCR-3′
3′-RCCGG      Y-5′
5′ GGCC
EagI5′- C/G G C C G -‘3
3′- G C C G G/C -‘5
5′-C      GGCCG-3′
3′-GCCGG      C-5′
5′ GGCC
EarI5′- C T C T T C N/N N N -‘3
3′- G A G A A G N N N N/-‘5
5′-CTCTTCN      NNN-3′
3′-GAGAAGNNNN      -5′
5′ NNN
EciI5′- G G C G G A N9 N N/-‘3
3′- C C G C C T N9/N N -‘5
5′-GGCGGAN9NN      -3′
3′-CCGCCTN9      NN-5′
3′ NN
Eco53kI5′- G A G/C T C -‘3
3′- C T C/G A G -‘5
5′-GAG      CTC-3′
3′-CTC      GAG-5′
Blunt
EcoNI5′- C C T N N/N N N A G G -‘3
3′- G G A N N N/N N T C C -‘5
5′-CCTNN      NNNAGG-3′
3′-GGANNN      NNTCC-5′
5′ N
EcoO109I5′- R G/G N C C Y -‘3
3′- Y C C N G/G R -‘5
5′-RG      GNCCY-3′
3′-YCCNG      GR-5′
5′ GNC
EcoP15I5′- C A G C A G N25/N N -‘3
3′- G T C G T C N25 N N/-‘5
5′-CAGCAGN25      NN-3′
3′-GTCGTCN25NN      -5′
5′ NN
EcoRI5′- G/A A T T C -‘3
3′- C T T A A/G -‘5
5′-G      AATTC-3′
3′-CTTAA      G-5′
5′ AATT
EcoRV5′- G A T/A T C -‘3
3′- C T A/T A G -‘5
5′-GAT      ATC-3′
3′-CTA      TAG-5′
Blunt
Esp3I5′- C G T C T C N/N N N N -‘3
3′- G C A G A G N N N N N/-‘5
5′-CGTCTCN      NNNN-3′
3′-GCAGAGNNNNN      -5′
5′ NNNN
FatI5′-/C A T G -‘3
3′- G T A C/-‘5
5′-      CATG-3′
3′-GTAC      -5′
5′ CATG
FauI5′- C C C G C N4/N N -‘3
3′- G G G C G N4 N N/-‘5
5′-CCCGCN4      NN-3′
3′-GGGCGN4NN      -5′
5′ NN
Fnu4HI5′- G C/N G C -‘3
3′- C G N/C G -‘5
5′-GC      NGC-3′
3′-CGN      CG-5′
5′ N
FokI5′- G G A T G N9/N N N N -‘3
3′- C C T A C N9 N N N N/-‘5
5′-GGATGN9      NNNN-3′
3′-CCTACN9NNNN      -5′
5′ NNNN
FseI5′- G G C C G G/C C -‘3
3′- C C/G G C C G G -‘5
5′-GGCCGG      CC-3′
3′-CC      GGCCGG-5′
3′ CCGG
FspEI5′- C C N12/N N N N -‘3
3′- G G N12 N N N N/-‘5
5′-CCN12      NNNN-3′
3′-GGN12NNNN      -5′
5′ NNNN
FspI5′- T G C/G C A -‘3
3′- A C G/C G T -‘5
5′-TGC      GCA-3′
3′-ACG      CGT-5′
Blunt
HaeII5′- R G C G C/Y -‘3
3′- Y/C G C G R -‘5
5′-RGCGC      Y-3′
3′-Y      CGCGR-5′
3′ GCGC
HaeIII5′- G G/C C -‘3
3′- C C/G G -‘5
5′-GG      CC-3′
3′-CC      GG-5′
Blunt
HgaI5′- G A C G C N5/N N N N N -‘3
3′- C T G C G N5 N N N N N/-‘5
5′-GACGCN5      NNNNN-3′
3′-CTGCGN5NNNNN      -5′
5′ NNNNN
HhaI5′- G C G/C -‘3
3′- C/G C G -‘5
5′-GCG      C-3′
3′-C      GCG-5′
3′ CG
HinP1I5′- G/C G C -‘3
3′- C G C/G -‘5
5′-G      CGC-3′
3′-CGC      G-5′
5′ CG
HincII5′- G T Y/R A C -‘3
3′- C A R/Y T G -‘5
5′-GTY      RAC-3′
3′-CAR      YTG-5′
Blunt
HindIII5′- A/A G C T T -‘3
3′- T T C G A/A -‘5
5′-A      AGCTT-3′
3′-TTCGA      A-5′
5′ AGCT
HinfI5′- G/A N T C -‘3
3′- C T N A/G -‘5
5′-G      ANTC-3′
3′-CTNA      G-5′
5′ ANT
HpaI5′- G T T/A A C -‘3
3′- C A A/T T G -‘5
5′-GTT      AAC-3′
3′-CAA      TTG-5′
Blunt
HphI5′- G G T G A N7 N/-‘3
3′- C C A C T N7/N -‘5
5′-GGTGAN7N      -3′
3′-CCACTN7      N-5′
3′ N
Hpy166II5′- G T N/N A C -‘3
3′- C A N/N T G -‘5
5′-GTN      NAC-3′
3′-CAN      NTG-5′
Blunt
Hpy188I5′- T C N/G A -‘3
3′- A G/N C T -‘5
5′-TCN      GA-3′
3′-AG      NCT-5′
3′ N
Hpy188III5′- T C/N N G A -‘3
3′- A G N N/C T -‘5
5′-TC      NNGA-3′
3′-AGNN      CT-5′
5′ NN
Hpy99I5′- C G W C G/-‘3
3′-/G C W G C -‘5
5′-CGWCG      -3′
3′-      GCWGC-5′
3′ CGWCG
HpyAV5′- C C T T C N5 N/-‘3
3′- G G A A G N5/N -‘5
5′-CCTTCN5N      -3′
3′-GGAAGN5      N-5′
3′ N
HpyCH4III5′- A C N/G T -‘3
3′- T G/N C A -‘5
5′-ACN      GT-3′
3′-TG      NCA-5′
3′ N
HpyCH4IV5′- A/C G T -‘3
3′- T G C/A -‘5
5′-A      CGT-3′
3′-TGC      A-5′
5′ CG
HpyCH4V5′- T G/C A -‘3
3′- A C/G T -‘5
5′-TG      CA-3′
3′-AC      GT-5′
Blunt
I-CeuI5′- T A A C T A T A A C G G T C C T A A/G G T A G C G A A -‘3
3′- A T T G A T A T T G C C A G/G A T T C C A T C G C T T -‘5
5′-TAACTATAACGGTCCTAA      GGTAGCGAA-3′
3′-ATTGATATTGCCAG      GATTCCATCGCTT-5′
3′ CTAA
I-SceI5′- T A G G G A T A A/C A G G G T A A T -‘3
3′- A T C C C/T A T T G T C C C A T T A -‘5
5′-TAGGGATAA      CAGGGTAAT-3′
3′-ATCCC      TATTGTCCCATTA-5′
3′ ATAA
KasI5′- G/G C G C C -‘3
3′- C C G C G/G -‘5
5′-G      GCGCC-3′
3′-CCGCG      G-5′
5′ GCGC
KpnI5′- G G T A C/C -‘3
3′- C/C A T G G -‘5
5′-GGTAC      C-3′
3′-C      CATGG-5′
3′ GTAC
LpnPI5′- C C D G N10/N N N N -‘3
3′- G G H C N10 N N N N/-‘5
5′-CCDGN10      NNNN-3′
3′-GGHCN10NNNN      -5′
5′ NNNN
MboI Sau3AI DpnII5′-/G A T C -‘3
3′- C T A G/-‘5
5′-      GATC-3′
3′-CTAG      -5′
5′ GATC
MboII5′- G A A G A N7 N/-‘3
3′- C T T C T N7/N -‘5
5′-GAAGAN7N      -3′
3′-CTTCTN7      N-5′
3′ N
MfeI5′- C/A A T T G -‘3
3′- G T T A A/C -‘5
5′-C      AATTG-3′
3′-GTTAA      C-5′
5′ AATT
MluCI5′-/A A T T -‘3
3′- T T A A/-‘5
5′-      AATT-3′
3′-TTAA      -5′
5′ AATT
MluI5′- A/C G C G T -‘3
3′- T G C G C/A -‘5
5′-A      CGCGT-3′
3′-TGCGC      A-5′
5′ CGCG
MlyI5′- G A G T C N5/-‘3
3′- C T C A G N5/-‘5
5′-GAGTCN5      -3′
3′-CTCAGN5      -5′
Blunt
MmeI5′- T C C R A C N18 N N/-‘3
3′- A G G Y T G N18/N N -‘5
5′-TCCRACN18NN      -3′
3′-AGGYTGN18      NN-5′
3′ NN
MnlI5′- C C T C N6 N/-‘3
3′- G G A G N6/N -‘5
5′-CCTCN6N      -3′
3′-GGAGN6      N-5′
3′ N
MscI5′- T G G/C C A -‘3
3′- A C C/G G T -‘5
5′-TGG      CCA-3′
3′-ACC      GGT-5′
Blunt
MseI5′- T/T A A -‘3
3′- A A T/T -‘5
5′-T      TAA-3′
3′-AAT      T-5′
5′ TA
MslI5′- C A Y N N/N N R T G -‘3
3′- G T R N N/N N Y A C -‘5
5′-CAYNN      NNRTG-3′
3′-GTRNN      NNYAC-5′
Blunt
MspA1I5′- C M G/C K G -‘3
3′- G K C/G M C -‘5
5′-CMG      CKG-3′
3′-GKC      GMC-5′
Blunt
MspI HpaII5′- C/C G G -‘3
3′- G G C/C -‘5
5′-C      CGG-3′
3′-GGC      C-5′
5′ CG
MspJI5′- C N N R N9/N N N N -‘3
3′- G N N Y N9 N N N N/-‘5
5′-CNNRN9      NNNN-3′
3′-GNNYN9NNNN      -5′
5′ NNNN
MwoI5′- G C N N N N N/N N G C -‘3
3′- C G N N/N N N N N C G -‘5
5′-GCNNNNN      NNGC-3′
3′-CGNN      NNNNNCG-5′
3′ NNN
NaeI5′- G C C/G G C -‘3
3′- C G G/C C G -‘5
5′-GCC      GGC-3′
3′-CGG      CCG-5′
Blunt
NarI5′- G G/C G C C -‘3
3′- C C G C/G G -‘5
5′-GG      CGCC-3′
3′-CCGC      GG-5′
5′ CG
NciI5′- C C/S G G -‘3
3′- G G S/C C -‘5
5′-CC      SGG-3′
3′-GGS      CC-5′
5′ S
NcoI5′- C/C A T G G -‘3
3′- G G T A C/C -‘5
5′-C      CATGG-3′
3′-GGTAC      C-5′
5′ CATG
NdeI5′- C A/T A T G -‘3
3′- G T A T/A C -‘5
5′-CA      TATG-3′
3′-GTAT      AC-5′
5′ TA
NgoMIV5′- G/C C G G C -‘3
3′- C G G C C/G -‘5
5′-G      CCGGC-3′
3′-CGGCC      G-5′
5′ CCGG
NheI5′- G/C T A G C -‘3
3′- C G A T C/G -‘5
5′-G      CTAGC-3′
3′-CGATC      G-5′
5′ CTAG
NlaIII5′- C A T G/-‘3
3′-/G T A C -‘5
5′-CATG      -3′
3′-      GTAC-5′
3′ CATG
NlaIV5′- G G N/N C C -‘3
3′- C C N/N G G -‘5
5′-GGN      NCC-3′
3′-CCN      NGG-5′
Blunt
NmeAIII5′- G C C G A G N19 N N/-‘3
3′- C G G C T C N19/N N -‘5
5′-GCCGAGN19NN      -3′
3′-CGGCTCN19      NN-5′
3′ NN
NotI5′- G C/G G C C G C -‘3
3′- C G C C G G/C G -‘5
5′-GC      GGCCGC-3′
3′-CGCCGG      CG-5′
5′ GGCC
NruI5′- T C G/C G A -‘3
3′- A G C/G C T -‘5
5′-TCG      CGA-3′
3′-AGC      GCT-5′
Blunt
NsiI5′- A T G C A/T -‘3
3′- T/A C G T A -‘5
5′-ATGCA      T-3′
3′-T      ACGTA-5′
3′ TGCA
NspI5′- R C A T G/Y -‘3
3′- Y/G T A C R -‘5
5′-RCATG      Y-3′
3′-Y      GTACR-5′
3′ CATG
Nt.AlwI5′- G G A T C N N N N/-‘3
3′-/C C T A G N N N N -‘5
5′-GGATCNNNN      -3′
3′-      CCTAGNNNN-5′
3′ GGATCNNNN
Nt.BbvCI5′- C C/T C A G C -‘3
3′-/G G A G T C G -‘5
5′-CC      TCAGC-3′
3′-      GGAGTCG-5′
3′ CC
Nt.BsmAI5′- G T C T C N/-‘3
3′-/C A G A G N -‘5
5′-GTCTCN      -3′
3′-      CAGAGN-5′
3′ GTCTCN
Nt.BspQI5′- G C T C T T C N/-‘3
3′-/C G A G A A G N -‘5
5′-GCTCTTCN      -3′
3′-      CGAGAAGN-5′
3′ GCTCTTCN
Nt.BstNBI5′- G A G T C N N N N/-‘3
3′-/C T C A G N N N N -‘5
5′-GAGTCNNNN      -3′
3′-      CTCAGNNNN-5′
3′ GAGTCNNNN
PI-PspI5′- T G G C A A A C A G C T A T T A T/G G G T A T T A T G G G T -‘3
3′- A C C G T T T G T C G A T/A A T A C C C A T A A T A C C C A -‘5
5′-TGGCAAACAGCTATTAT      GGGTATTATGGGT-3′
3′-ACCGTTTGTCGAT      AATACCCATAATACCCA-5′
3′ TTAT
PI-SceI5′- A T C T A T G T C G G G T G C/G G A G A A A G A G G T A A T -‘3
3′- T A G A T A C A G C C/C A C G C C T C T T T C T C C A T T A -‘5
5′-ATCTATGTCGGGTGC      GGAGAAAGAGGTAAT-3′
3′-TAGATACAGCC      CACGCCTCTTTCTCCATTA-5′
3′ GTGC
PacI5′- T T A A T/T A A -‘3
3′- A A T/T A A T T -‘5
5′-TTAAT      TAA-3′
3′-AAT      TAATT-5′
3′ AT
PciI5′- A/C A T G T -‘3
3′- T G T A C/A -‘5
5′-A      CATGT-3′
3′-TGTAC      A-5′
5′ CATG
PflMI5′- C C A N N N N/N T G G -‘3
3′- G G T N/N N N N A C C -‘5
5′-CCANNNN      NTGG-3′
3′-GGTN      NNNNACC-5′
3′ NNN
PleI5′- G A G T C N4/N -‘3
3′- C T C A G N4 N/-‘5
5′-GAGTCN4      N-3′
3′-CTCAGN4N      -5′
5′ N
PluTI5′- G G C G C/C -‘3
3′- C/C G C G G -‘5
5′-GGCGC      C-3′
3′-C      CGCGG-5′
3′ GCGC
PmeI5′- G T T T/A A A C -‘3
3′- C A A A/T T T G -‘5
5′-GTTT      AAAC-3′
3′-CAAA      TTTG-5′
Blunt
PmlI5′- C A C/G T G -‘3
3′- G T G/C A C -‘5
5′-CAC      GTG-3′
3′-GTG      CAC-5′
Blunt
PpuMI5′- R G/G W C C Y -‘3
3′- Y C C W G/G R -‘5
5′-RG      GWCCY-3′
3′-YCCWG      GR-5′
5′ GWC
PshAI5′- G A C N N/N N G T C -‘3
3′- C T G N N/N N C A G -‘5
5′-GACNN      NNGTC-3′
3′-CTGNN      NNCAG-5′
Blunt
PsiI-v25′- T T A/T A A -‘3
3′- A A T/A T T -‘5
5′-TTA      TAA-3′
3′-AAT      ATT-5′
Blunt
PspGI5′-/C C W G G -‘3
3′- G G W C C/-‘5
5′-      CCWGG-3′
3′-GGWCC      -5′
5′ CCWGG
PspOMI5′- G/G G C C C -‘3
3′- C C C G G/G -‘5
5′-G      GGCCC-3′
3′-CCCGG      G-5′
5′ GGCC
PspXI5′- V C/T C G A G B -‘3
3′- B G A G C T/C V -‘5
5′-VC      TCGAGB-3′
3′-BGAGCT      CV-5′
5′ TCGA
PstI5′- C T G C A/G -‘3
3′- G/A C G T C -‘5
5′-CTGCA      G-3′
3′-G      ACGTC-5′
3′ TGCA
PvuI5′- C G A T/C G -‘3
3′- G C/T A G C -‘5
5′-CGAT      CG-3′
3′-GC      TAGC-5′
3′ AT
PvuII5′- C A G/C T G -‘3
3′- G T C/G A C -‘5
5′-CAG      CTG-3′
3′-GTC      GAC-5′
Blunt
RsaI5′- G T/A C -‘3
3′- C A/T G -‘5
5′-GT      AC-3′
3′-CA      TG-5′
Blunt
RsrII5′- C G/G W C C G -‘3
3′- G C C W G/G C -‘5
5′-CG      GWCCG-3′
3′-GCCWG      GC-5′
5′ GWC
SacI5′- G A G C T/C -‘3
3′- C/T C G A G -‘5
5′-GAGCT      C-3′
3′-C      TCGAG-5′
3′ AGCT
SacII5′- C C G C/G G -‘3
3′- G G/C G C C -‘5
5′-CCGC      GG-3′
3′-GG      CGCC-5′
3′ GC
SalI5′- G/T C G A C -‘3
3′- C A G C T/G -‘5
5′-G      TCGAC-3′
3′-CAGCT      G-5′
5′ TCGA
SapI BspQI5′- G C T C T T C N/N N N -‘3
3′- C G A G A A G N N N N/-‘5
5′-GCTCTTCN      NNN-3′
3′-CGAGAAGNNNN      -5′
5′ NNN
Sau96I5′- G/G N C C -‘3
3′- C C N G/G -‘5
5′-G      GNCC-3′
3′-CCNG      G-5′
5′ GNC
SbfI5′- C C T G C A/G G -‘3
3′- G G/A C G T C C -‘5
5′-CCTGCA      GG-3′
3′-GG      ACGTCC-5′
3′ TGCA
ScaI5′- A G T/A C T -‘3
3′- T C A/T G A -‘5
5′-AGT      ACT-3′
3′-TCA      TGA-5′
Blunt
ScrFI5′- C C/N G G -‘3
3′- G G N/C C -‘5
5′-CC      NGG-3′
3′-GGN      CC-5′
5′ N
SexAI5′- A/C C W G G T -‘3
3′- T G G W C C/A -‘5
5′-A      CCWGGT-3′
3′-TGGWCC      A-5′
5′ CCWGG
SfaNI5′- G C A T C N5/N N N N -‘3
3′- C G T A G N5 N N N N/-‘5
5′-GCATCN5      NNNN-3′
3′-CGTAGN5NNNN      -5′
5′ NNNN
SfcI5′- C/T R Y A G -‘3
3′- G A Y R T/C -‘5
5′-C      TRYAG-3′
3′-GAYRT      C-5′
5′ TRYA
SfiI5′- G G C C N N N N/N G G C C -‘3
3′- C C G G N/N N N N C C G G -‘5
5′-GGCCNNNN      NGGCC-3′
3′-CCGGN      NNNNCCGG-5′
3′ NNN
SfoI5′- G G C/G C C -‘3
3′- C C G/C G G -‘5
5′-GGC      GCC-3′
3′-CCG      CGG-5′
Blunt
SgrAI5′- C R/C C G G Y G -‘3
3′- G Y G G C C/R C -‘5
5′-CR      CCGGYG-3′
3′-GYGGCC      RC-5′
5′ CCGG
SmaI5′- C C C/G G G -‘3
3′- G G G/C C C -‘5
5′-CCC      GGG-3′
3′-GGG      CCC-5′
Blunt
SmlI5′- C/T Y R A G -‘3
3′- G A R Y T/C -‘5
5′-C      TYRAG-3′
3′-GARYT      C-5′
5′ TYRA
SnaBI5′- T A C/G T A -‘3
3′- A T G/C A T -‘5
5′-TAC      GTA-3′
3′-ATG      CAT-5′
Blunt
SpeI5′- A/C T A G T -‘3
3′- T G A T C/A -‘5
5′-A      CTAGT-3′
3′-TGATC      A-5′
5′ CTAG
SphI5′- G C A T G/C -‘3
3′- C/G T A C G -‘5
5′-GCATG      C-3′
3′-C      GTACG-5′
3′ CATG
SrfI5′- G C C C/G G G C -‘3
3′- C G G G/C C C G -‘5
5′-GCCC      GGGC-3′
3′-CGGG      CCCG-5′
Blunt
SspI5′- A A T/A T T -‘3
3′- T T A/T A A -‘5
5′-AAT      ATT-3′
3′-TTA      TAA-5′
Blunt
StuI5′- A G G/C C T -‘3
3′- T C C/G G A -‘5
5′-AGG      CCT-3′
3′-TCC      GGA-5′
Blunt
StyD4I5′-/C C N G G -‘3
3′- G G N C C/-‘5
5′-      CCNGG-3′
3′-GGNCC      -5′
5′ CCNGG
StyI5′- C/C W W G G -‘3
3′- G G W W C/C -‘5
5′-C      CWWGG-3′
3′-GGWWC      C-5′
5′ CWWG
SwaI5′- A T T T/A A A T -‘3
3′- T A A A/T T T A -‘5
5′-ATTT      AAAT-3′
3′-TAAA      TTTA-5′
Blunt
TaqI-v25′- T/C G A -‘3
3′- A G C/T -‘5
5′-T      CGA-3′
3′-AGC      T-5′
5′ CG
TfiI5′- G/A W T C -‘3
3′- C T W A/G -‘5
5′-G      AWTC-3′
3′-CTWA      G-5′
5′ AWT
TseI ApeKI5′- G/C W G C -‘3
3′- C G W C/G -‘5
5′-G      CWGC-3′
3′-CGWC      G-5′
5′ CWG
Tsp45I5′-/G T S A C -‘3
3′- C A S T G/-‘5
5′-      GTSAC-3′
3′-CASTG      -5′
5′ GTSAC
TspRI5′- N N C A S T G N N/-‘3
3′-/N N G T S A C N N -‘5
5′-NNCASTGNN      -3′
3′-      NNGTSACNN-5′
3′ NNCASTGNN
Tth111I PflFI5′- G A C N/N N G T C -‘3
3′- C T G N N/N C A G -‘5
5′-GACN      NNGTC-3′
3′-CTGNN      NCAG-5′
5′ N
XbaI5′- T/C T A G A -‘3
3′- A G A T C/T -‘5
5′-T      CTAGA-3′
3′-AGATC      T-5′
5′ CTAG
XcmI5′- C C A N N N N N/N N N N T G G -‘3
3′- G G T N N N N/N N N N N A C C -‘5
5′-CCANNNNN      NNNNTGG-3′
3′-GGTNNNN      NNNNNACC-5′
3′ N
XhoI PaeR7I5′- C/T C G A G -‘3
3′- G A G C T/C -‘5
5′-C      TCGAG-3′
3′-GAGCT      C-5′
5′ TCGA
XmaI TspMI5′- C/C C G G G -‘3
3′- G G G C C/C -‘5
5′-C      CCGGG-3′
3′-GGGCC      C-5′
5′ CCGG
XmnI5′- G A A N N/N N T T C -‘3
3′- C T T N N/N N A A G -‘5
5′-GAANN      NNTTC-3′
3′-CTTNN      NNAAG-5′
Blunt
ZraI5′- G A C/G T C -‘3
3′- C T G/C A G -‘5
5′-GAC      GTC-3′
3′-CTG      CAG-5′
Blunt

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